Mediadores de oxidacion en líquido sinovial

XXXIII Congreso Mexicano de Reumatologia
17-22 de febrero de 2005
Villahermosa, Tab.

S-20
Mediadores de oxidación en líquido sinovial. Estudio comparativo en 3 padecimientos vs sujetos sanos.

Gallardo-Montoya JM, Bañuelos-Ramírez D, Sánchez-Alonso S.
Hospital de especialidades CMN MAC "Gral. Manuel Ávila Camacho" UMAE. IMSS. Puebla, Pue., y Unidad de Investigación Biomédica. CMN S XXI. México, D.F. México.

Introducción: Se ha considerado al oxido nítrico (ON), el superoxido e intermediarios como L-citrulina y otras moléculas como importantes mediadores deletéreos en diversos padecimientos y son parte importante de la cascada de muerte celular. Sus concentraciones en líquido sinovial normal y en algunos padecimientos no se han estudiado suficientemente.

Objetivo: determinar y contrastar las concentraciones de ON, superoxido y otros agentes en 3 grupos de padecimientos y contrastarlos con sujetos voluntarios sanos.

Metodología: Mediante técnica habitual de punción en rodillas se obtuvo líquido sinovial en pacientes con OA, AR, A Reactiva y voluntarios sanos. Cada grupo con n=10. La muestra se congeló y se procesó mediante técnicas de L-Name y PCR, además de citoquímico y cultivos para gérmenes habituales. De requerirse infiltración se realizó en el mismo tiempo.

Resultados: Las concentraciones menores de mediadores de oxidación ocurrieron en sujetos sanos de manera global contra todos los padecimientos (p<0.0001)

Tight junctions are sensitive to peptides eliminated in the urine.

Tight junctions are sensitive to peptides eliminated in the urine.

Gallardo JM; Hernández JM; Contreras RG; Flores-Maldonado C; González-Mariscal L; Cereijido M.

J Membr Biol. 2002; 188(1):33-42

Orient Center of Research, Mexican Institute of Social Security, Puebla, Puebla, México.

We prepare an extract of dog urine (DLU) that, when applied to monolayers of MDCK cells (epithelial, derived from a normal dog), enhances the transepithelial electrical resistance (TER) in a dose-dependent manner. This increase is not reflected in variations of the linear amount of TJ nor in changes of the pattern of junctional strands as observed in freeze fracture replicas, nor in the distribution of claudin 1 (a membrane protein of the TJ) nor ZO-1 (a TJ-associated protein). A preliminary characterization of the active component of DLU indicates that it weighs 30-50 kDa, bears a net negative electric charge, and is destroyed by type I protease but not by 10-min boiling. DLUs prepared from human, dog, rabbit and cat are effective on MDCK cells. However, dog DLU increases TER in MDCK (dog) as well as LLCPK1 (pig) monolayers, but not in other epithelial cell lines such as LLCRK1 (rabbit), PTK2 (kangaroo) and MA-104 (monkey), nor in the endothelial cell line CPA47 (cow). Given that in its transit from the glomerulus to the urinary bladder the filtrate increases its concentration by more than two orders of magnitude, the substance(s) we report may act at increasingly higher concentrations in each segment, and afford a potential clue to the progressive increase of TER across the walls of the nephron from the proximal to the collecting duct.

Caracteristicas de la saliva de pacientes diabeticos

2005 - XIV JORNADA DE INVESTIGACION EN SALUD DEL ESTADO DE PUEBLA

Resumen 236

Caracteristicas de la saliva de pacientes diabeticos

Juan M. Gallardo (a), Gisela Quintanar Salcedo (b), Catalina Flores-Maldonado (c), Rosa Ma. Estrada Domi­nguez (b), AgustinRuiz-Cabrera (d) y Jessica V. Cuellar (b).

a Unidad de Investigacion Medica en Enfermedades Nefrologicas, Hospital de Especialidades, Centro Medico Nacional Siglo "XXI", IMSS, Mexico, D.F., b Facultad de Estomatologia, BUAP., Puebla, Pue., c Departamento de Fisiología, Centro de Investigacion y de Estudios Avanzados del IPN., Mexico, D.F., y d Laboratorio de Investigacion Medica, Facultad Estudios Superiores-Iztacala, UNAM. Los Reyes, Iztacala, Mex.
Correo-e: gallardo@salud.gob.mx

OBJETIVO: Determinar las caracteri­sticas fisicoqui­micas y bioquimicas de la saliva de un grupo de pacientes diabéticos y compararlas contra el grupo testigo.

PROCEDIMIENTOS: Se reclutaron a pacientes con diabetes mellitus tipo 11 y pacientes aparentemente sanos, pero con los mismos factores de riesgo de los pacientes diabeticos. Se midieron el flujo salival, concentracion de proteinas, glucosa, carbohidratos totales, y oxido ni­trico en la saliva no estimulada y estimulada.

RESULTADOS: Los pacientes diabeticos presentaron disminucion el pH salival, disminucion en el flujo salival, exceso de espuma salival, incremento en la concentración de glucosa, carbohidrato s totales, proteinas totales y oxido nitrico comparados con los testigos.

CONCLUSION: Este trabajo demuestra que la DM modifica de manera sustancial las caracteristicas fsicoqui­micoas como bioqui­micas de la saliva. Estos cambios pudieran ser los responsables de algunas de las alteraciones orales que se presentan en el paciente con DM. Asi mismo proponemos que la determinacion de glucosa y de los carbohidratos totales en saliva pueden ser de utilidad en el diagnostico y control de la enfermedad.

Agradecimientos: Este trabajo fue parcialmente fmanciado por Fondo para el Fomento de la Investigacion Medica (FOFOI) del Instituto Mexicano del Seguro Social. No. 2003-088 otorgado a JMG.

Estres oxidativo en fumadores cronicos

2005 - XIV JORNADA DE INVESTIGACION EN SALUD DEL ESTADO DE PUEBLA.

Resumen 235

Estres oxidativo en fumadores cronicos

Juan M. Gallardo (a), Elia Patricia Juarez-Razo (b,c), Catalina E. Flores-Maldonado (d), Gisela Quintanar Salcedo (c).

a Unidad de Investigacion Medica en Enfermedades Nefrologicas. Centro Medico Nacional "Siglo XXI" del IMSS. Mexico, D.F. b Servicio de Odontologia, UMF-12, Cholula, Pue., c Facultad de Estomatologia, Benemerita Universidad Autonoma de Puebla, Puebla, Pue. d Departamento de Fisiologi­a, Centro de Investigacion y de Estudios Avanzados del IPN., Mexico, D.F. Correo-e:gallardo@salud.gob.mx

OBJETIVO: Estudiar en impacto del tabaquismo en las concentraciones plasmaticas del oxido nitrico, un agente vasodilatador y radical libre asi­ como en el malondialdehido, un producto de la lipoperoxidacion lipi­dica, en los sujetos expuestos a la inhalacion del humo del tabaco.

PROCEDIMIENTO: Estudio transversal, comparativo, no pareado, en poblacion abierta, estudiados de septiembre a noviembre de 2004. Se seleccionaron a sujetos no fumadores (grupo testigo) y sujetos fumadores (grupo expuesto), ambos grupos comparables en edad, sexo y caracteristicas sociodemograficas. Se obtuvieron muestras salivales donde se le determino las concentraciones de oxido ni­trico y malondialdehi­do.

RESULTADOS: Existe un incremento significativo del ON y del MDA salival en los sujetos fumadores vs. los sujetos nofumadores (p =<0.001)

CONCLUSIONES: Los niveles elevados de MDA plasmaticos estan muy relacionados con la exposicion de humo de tabaco, estos resultados apoyan la teori­a de que el consumo de tabaco es causa de estres oxidativo. Los resultados de este trabajo justifican que se continue en el futuro evaluando la presencia de estos mismos marcadores estudiados en sujetos con antecedentes de tabaquismo cronico y que actualmente han abandonado ese mal habito.

Peroxidacion lipidica en espermatozoides de sujetos aparantemente normales

2005 - XIV JORNADA DE INVESTIGACIÓN EN SALUD DEL ESTADO DE PUEBLA

Resumen 234

Peroxidacion lipidica en espermatozoides de sujetos aparentemente sanos

Juan M: Gallardo (a), y Jose A. Sanchez-Galindo (b)

Unidad de Investigacion Medica en Enfermedades Nefrologicas,Hospital de Especialidades, Centro Medico Nacional "Siglo XX!", IMSS, Mexico, D.F., b Servicio de Urologi­a, Hospital de Especialidades, Centro Medico Nacional "MAC", Puebla, Pue. Correo-e: gallardo@salud.gob.mx

OBJETIVO: Determinar la concentracion de MDA en los esperrnatozoides de un grupo de hombres aparentemente sanos.

PROCEDIMIENTOS: Participaron voluntariamente 20 sujetos aparentemente sanos (amplitud 18-45 años, 26.7 +- 7.3) a quienes despues de eyacular se obtuvo el li­quido seminal mediante centrifugacion refrigerada a 2000 rpm. La muestras fueron analizadas dentro de las primeras 48 h de obtenidas. Para la reaccion del TBA, 20 x 10 6 espermatozoides humanos se incubaron con sulfato ferroso 0.2 mM y ascorbato de sodio 1 mM. Luego de 1 h de incubacion a 37°C, la suspension celular se desproteinizo con acido tricloroacetico al 20%. El sobrenadante se incubo a 90°C por 10 min, posteriormente se adiciono acido tiobarbiturico al 2%. La reaccion colorida se determino espectrofotometricamente.

RESULTADOS: Al analizar los resultados obtenidos se encontro que los valores obtenidos no siguen una distribucion normal.

MDA (ng/ngL)
N .......... X ......... D.E ........ Moda ......... Mediana
20 ........ 778.3 .... 387........ 603.4 .......... 711.5

CONCLUSION: La importancia de este trabajo radica en que actualmente se hace necesario conocer en que grado la lipoperoxidacion pudiera afectar a los individuos con antecedentes de infertilidad masculina, y para ello es necesario conocer cuales son los valores "normales" clinicos de este marcador de estres oxidativo, que aun no ha sido reportado en la literatura medica. Este estudio proporciona datos preliminares de los valores que pueden encontrarse en una poblacion aparentemente normal.

Mediadores de oxidacion en liquido sinovial

2005 - XIV JORNADA DE INVESTIGACION EN SALUD DEL ESTADO DE PUEBLA

Resumen No. 232

Mediadores de oxidacion en liquido sinovial: Estudio comparativo en 3 padecimientos vs. sujetos sanos.

Gallardo-Montoya JM, Ramirez-Palrna MM, Bañuelos-Rami­rez D, Sanchez-Alonso S.

Hospital de especialidades CMN MAC "Gral. Manuel Avila Camacho" UMAE y UMF 01 IMSS. Puebla, Pue., y Unidad de Investigacion Biomedica. CMN S XXI. Mexico, D.F. .

Se ha considerado al oxido nitrico (ON), el superoxido e intermediarios como L-citrulina y otras moleculas como importantes mediadores deletereos en diversos padecimientos y son parte importante de la cascada de muerte celular. Sus concentraciones en liquido sinovial normal y en algunos padecimientos no se han estudiado suficientemente.

Objetivo: determinar y contrastar las concentraciones de ON, superoxido y otros agentes en 3 grupos de padecimientos y contrastarlos con sujetos voluntarios sanos.

Metodologia: Mediante tecnica habitual de puncion en rodillas se obtuvo li­quido sinovial en pacientes con OA, AR, ARe activa y voluntarios sanos. Cada grupo con n=10. La muestra se congelo y se proceso mediante tecnicas de L-Name y PCR, ademas de citoqui­mico y cultivos para germenes habituales. De requerirse infiltracion se realizo en el mismo tiempo.

Resultados: Las concentraciones menores de mediadores de oxidacion ocurrieron en sujetos sanos de manera global contra todos los padecimientos (p<0.0001)

Conclusion: Las concentraciones elevadas de MOLS en padecimientos reumaticos, en contraste con concentraciones bajas en sanos y OA pueden estar directamente relacionadas con el daño observado.

Efecto de los antibioticos aminoglucosidos en la funcion antioxidante renal

2005 - XIV JORNADAS DE INVESTIGACIÓN EN SALUD DEL ESTADO DE PUEBA

Resumen No. 229

Efecto de los antibioticos aminoglucosidos en la funcion antioxidante renal

Juan M. Gallardo

Unidad de Investigación Médica en Enfermedades Nefrológicas, CMN "Siglo XXI", IMSS. Correo-e:labtox@yahoo.com

OBJETIVO: Estudiar el efecto de la gentamicina y la estreptomicina en la función antioxidativa renal.

PROCEDIMIENTOS: Veinticuatro ratas de la cepa Wistar fueron divididas en tres grupos, GI: Testigo, solución salina isotónica; Gil: sulfato de estreptomicina, 300 mg/kg/IP /día/4 días; GIII: Sulfato de gentamicina 40 mg/kg/IP/día/4 días. Se evaluó en plasma: creatinina sérica, ácido úrico, proteínas, glucosa, bilirrubina, por métodos espectrofotométricos; potasioy sodio con flamometría y en homogeneizado de riñón se midió: proteína, superóxido de dismutasa (SOD), malondialdehído (MDA) y óxido nítrico (NOx) por métodos espectrofotométricos.

RESULTADOS: Se encontró que existe una marcada diminución en la presencia de ácido úrico, glucosa, bilirrubina, e incremento en creatinina, y óxido nítrico en las ratas tratadas con gentarnicina en plasma, mientras que en el homogeneizado renal hay incremento en la peroxidaxión lipídica y óxido nítrico, pero sin cambios en la superóxido de dismutasa.

CONCLUSIONES: La estreptomicina es el aminoglucósido con menor efecto nefrotóxico (comparable a los resultados encontrados en humanos) en tanto que la gentamicina es mas nefrotóxica, los resultados de este estudio demuestran que la gentarnicina afecta claramente la función antioxidativa renal.